简述提取核酸的步骤(有几种核酸标记的方法)

简述提取核酸的步骤?

一、DNA的分离

利用核蛋白溶于水和高盐溶液,但不溶于生理盐溶液的性质进行分离。

流程:破细胞→浓盐溶液提取→生理盐溶液沉淀→苯酚变性除蛋白→水相DNA用冷乙醇沉淀。

有几种核酸标记的方法?

通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。

主要有以下几种方法:

1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。

2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。

3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应(PCR)扩增细胞因子cDNA,Southernblot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。

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